凯氏定氮法的优缺点及注意事项(凯氏定氮法的优缺点及注意事项有哪些)

文章 2年前 (2022) 飞天叮当猫
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凯氏定氮法的优缺点及注意事项(凯氏定氮法的优缺点及注意事项有哪些)

凯氏定氮法的优缺点及注意事项

一、凯氏定氮法的优缺点
优点:
1、可用于所有食品的蛋白质分析中。
2、操作相对比较简单。
3、实验费用较低。
4、结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法。
5、用微量凯氏定氮法可测定样品中微量的蛋白质。
缺点:
1、最终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮。
2、实验时间太长,至少需要2小时才能完成。
3、精度差,精度低于双缩脲法。
二、凯氏定氮法注意事项
1、样品应是均匀的,固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀。
2、样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上,万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低。
3、硝化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入百分之三十过氧化氢2到3毫升,促使氧化。
4、在整个消化过程中,不要用强火。保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失。

凯氏定氮法的优缺点及注意事项

  优点:可用于所有食品的蛋白质分析中;操作相对比较简单;实验费用较低;结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法;用改进方法可测定样品中微量的蛋白质。缺点:最终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮;实验时间太长;精度差,精度低于双缩脲法;所用试剂有腐蚀性。

   注意事项

  1、样品应是均匀的,如是固体样品应事先研细,液体样要混合均匀。

  2、蒸馏时,蒸汽发生要充足均匀,加入样品后,应用少量蒸馏水冲洗,以免影响结果偏低,加氧化镁要快,防止氨损失。冷凝管口应渗入吸收液中,防止氨损失。

  3.蒸馏完毕后,应先将接受瓶液面离开冷凝管下端,并放在其下方,冷凝液清洗管口内壁,再蒸1min后关掉热源,否则会造成吸收液倒吸。

  凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。

  由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。

凯氏定氮法的优缺点及注意事项

1.样品应是均匀的,如是固体样品应事先研细,液体样要混合均匀
2.蒸馏时,蒸汽发生要充足均匀,加入样品后,应用少量蒸馏水冲洗,以免影响结果偏低,加氧化镁要快,防止氨损失.冷凝管口应渗入吸收液中,防止氨损失.
3.蒸馏完毕后,应先将接受瓶液面离开冷凝管下端,并放在其下方,冷凝液清洗管口内壁,再蒸1min后关掉热源,否则会造成吸收液倒吸.

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蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,并换算成蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量。

凯氏定氮法缺点:

1、最终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮。

2、实验时间太长,至少需要2小时才能完成。

3、精度差,精度低于双缩脲法。

凯氏定氮法注意事项:

1、样品应是均匀的,固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀。

2、样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上,万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低。

3、硝化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入百分之三十过氧化氢2到3毫升,促使氧化。

4、在整个消化过程中,不要用强火。保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失。

凯氏定氮法与分光光度法的优缺点

凯氏定氮法的优点:可用于所有食品的蛋白质分析中;操作相对比较简单;实验费用较低;结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法;用改进方法(微量凯氏定氮法)可测定样品中微量的蛋白质。

缺点:最终测定的是总有机氮,而不只是蛋白质氮;实验时间太长(至少需要2h才能完成);精度差,精度低于双缩脲法;所用试剂有腐蚀性。

分光光度法的优点:灵敏度高;仪器设备简单,操作简便、快速;应用广泛。

缺点是:准确度相对不高;有的检测不可用,有限制性。

蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,并换算成蛋白质含量。

在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。

物质与光作用,具有选择吸收的特性。有色物质的颜色是该物质与光作用产生的。即有色溶液所呈现的颜色是由于溶液中的物质对光的选择性吸收所致。

由于不同的物质其分子结构不同,对不同波长光的吸收能力也不同,因此具有特征结构的结构集团,存在选择吸收特性的最大实收波长,形成最大吸收峰,而产生特有的吸收光谱。

来源:——凯氏定氮法

来源:——分光光度法

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